血液代用品样品中牛白血病病毒的检测

摘要

牛白血病是由牛白血病病毒(BLV)引起的牛的一种慢性肿瘤性疾病[1]。目前此病几乎遍及全世界各养牛国家，亚洲的日本发生也较多。此病在我国于1974年首次发现于上海，目前本病有逐渐扩大蔓延的趋势。在某些牛群中血清阳性率已达30％～50％，已成为牛的重要传染病之一。牛源的血液代用品是生物医学研究的重要方向，具有广阔的应用前景，所以此类代用品病毒安全性检测就日益受到关注。血液代用品及其原料血中BLV及潜在BLV的检测对于控制本病在群内及可能的跨种群传播的控制都有非常重要的意义。 本研究旨在建立一种有效的BLV核酸检测体系。经序列分析后，基于BLV tax区段设计引物，建立BLV核酸RT-PCR检测技术，对原料血抗体和血液代用品样品中BLV核酸进行检测，并利用BLV抗体检测试剂盒对血液样品进行ELISA检测验证。结果显示，BLV核酸RT-PCR检测技术对20份原料血样品的抗体检测均阴性。通过国内外引物嵌套RT-PCR方法、BLV抗体检测试剂盒对该样品检测验证均表明无BLV的存在，样品来源于未感染BLV的阴性血样。 普查群内BLV感染通常采用血清学试验如ELISA等。但是也有人报道由于BLV病毒的个别变异，仅依靠抗体检测还不能排除BLV感染的可能[2]。因此对于样品仅依靠血清血检测是不够的，基因诊断可以提供更为可靠的数据。Martin等报道[3]同样一批可疑样品，间接ELISA的检出率为10％，而依靠PCR方法的检出率可达到17％。所以对于大量样品BLV的检测，血清学试验与基因诊断相结合对于检测该病毒的存在是可靠的。此外，PCR检测对BLV早期感染的检测也具有重要意义[3]。