肠出血性大肠杆菌O157：H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究

摘要

克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7转位紧密素受体(Tir)基因，并研究其抗原性。选用pET28原核表达载体，体外构建Tir原核表达重组菌，并在大肠杆菌中获得高效表达。以Tir免疫家兔获得了高效价多克隆抗体，Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。选用Hep-2细胞对Tir重组蛋白进行粘附特性分析，表达Tir蛋白能够抑制O157：H7对Hep-2细胞的粘附。表达Tir蛋白免疫Balb/c小鼠，并进行攻毒保护评价，结果显示表达Tir蛋白具有良好的免疫原性和反应性和一定的免疫保护性。在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因，所获Tir具有良好的抗原性，可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。