杂交猪γ-干扰素全基因克隆及原核表达

摘要

RT-PCR扩增技术，从经ConA活化的猪外周血淋巴细胞中提取的总RNA中扩增出IFN-γ cDNA，将其克隆到pMD18-T载体中进行测序验证后，与原核表达载体pET30a(+)重组，构建含IFN-γ基因的重组表达质粒pET30a(+)/IFN-γ，测序结果与NCBI中已登录的IFN-γ基因序列比对，核苷酸序列同源性在98.6％～100％之间，氨基酸同源性在96.4％-99.4％;诱导表达含Hisx6的IFN-γ重组蛋白，经sDS-PAGE和Western-blotting分析表明该重组蛋白进行成功表达，相对分子量约26Ku，表达量约为33％，主要存于包涵体中，具有良好的免疫学活性，本研究的进行为猪源γ-干扰素深入研究奠定基础。