Apo-tPA融合蛋白在鸡胚肝细胞中的分泌表达及其活性检测

摘要

探讨Apo介导的t-PA融合蛋白在鸡胚肝细胞中分泌表达的可行性和生物学活性。将编码人组织型纤溶酶原激活剂功能区的基因片段△t-PA与鸡VLOLy组装前体apo-B100进行融合，定向克隆到pCDNA3表达载体CMV启动子下游，构建pCDNA3-Apo-△tPA表达载体。将pCDNA3-Apo-△tPA以脂质体包裹后转入体外培养的鸡胚肝细胞，ELISA法检测融合蛋白表达水平，发色底物法检测表达产物生物学活性。结果显示，融合基因在鸡胚肝细胞中能有效表达并能够分泌到细胞外，48h表达水平最高达675.3ng/10O(6)cells/24h，表达产物活性达135.8IU/10(6)cells/24h。apo-BlOO介导的t-PA在鸡胚肝细胞中成功表达，为外源基因在鸡体内表达并实现在卵黄中积淀奠定了坚实的基础。