三种贝类原虫多重PCR检测方法的建立

摘要

根据基因库中单孢子虫、派琴虫病和马尔太虫的基因序列，分别设计了三对特异性引物，通过对多重PCR扩增条件的优化，研究建立了可同时检测鉴别这三种原虫的多重PCR。该技术对同一样品中的单孢子虫、派琴虫病和马尔太虫模板进行扩增，结果均同时得到3条大小与实验设计相符的244bp(单孢子虫)、596bp(派琴虫病)和478bp(马尔太虫)的特异性扩增带，对其它贝类病原核酸的扩增结果为阴性。敏感性试验结果表明，该技术最低能检测到10pg的单孢子虫、派琴虫病和马尔太虫DNA，结果提示该技术适用于这三种原虫的临床快速检测和鉴别诊断。