短链RNA抑制神经母细胞瘤MYCN基因表达诱发肿瘤细胞凋亡

摘要

目的：MYCN基因扩增与否是判断神经母细胞瘤预后及分型的重要指标。我们拟通过抑制MYCN高扩增NB肿瘤细胞中MYCN的表达，并观察肿瘤细胞凋亡、增殖的改变，为以MYCN扩增与否为标志的NB个体化治疗积累数据。方法：设计合成MYCN短链干扰RNA，转染MYCN高扩增表达的神经母细胞瘤细胞系LAN-1，抑制MYCN基因的表达，荧光定量PCR法及western—blot法检验MYCN mRNA及蛋白表达受抑制情况；培养24小时后ELISA法检验DNA碎片，检验肿瘤细胞凋亡，western-blot法检验神经元特异性烯醇酶表达检验肿瘤细胞分化情况。结果：荧光定量PCR显示，转染12h MYCN mRNA表达0．53±0．10、24h MYCN mRNA表达0．28±0.09，表达显著降低(P<0.05)，western-blot转染12h MYCNmRNA表达0．76±0．13、24h MYCN mRNA表达0．444-0.07，表达显著降低(P<0.05)．提示MYCN-siRNA可以有效抑制肿瘤细胞中MYCN基因表达；MYCN基因表达抑制后神经母细胞瘤细胞凋亡增加(抑制组DNA碎片值1．90±0．12，对照组I．13±0.09,P<0.05)，且NSE表达增高(抑制组0．472±0．102，对照组1.035±0．140，P<0.05)，提示LAN-1肿瘤细胞分化增强。结论：抑制MYCN高表达扩增神经母细胞瘤中MYCN基因的表达可以促进肿瘤细胞凋亡，促进细胞分化。