禽病原性大肠杆菌△iro △tsh缺失株的构建

摘要

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点。中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pUC18-tshFRGM,从中切下此3个片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-iroBNEGFP和pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到受体APECE037株中,根据同源重组原理,分别筛选出E037基因缺失突变株E037(△iro)、E037(△tsh)和E037(△iro△tsh)。动物实验结果表明E037(△iro)、E037(△tsh)和E037(△iro△tsh)突变株的致病性均有了明显下降.铁系统和温度敏感性血凝素在APEC E037株的致病性和持续感染中发挥重要的作用,但两个基因的致病协同能力不明显。在243株禽源大肠杆菌中,有205株为iro+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为89.8％(184/205)、8.8％(18/205)和1.5％(3/205)；有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4％(146/167)、12.6％(21/167)和0％(0/167)。结果显示铁系统和温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子。