微重力条件下胰岛与睾丸支持细胞共培养的实验研究

摘要

目的:利用旋转壁式生物反应器(rotary wall vessel bioreactor，RWV)模拟的微重力培养条件共培养成年大鼠胰岛和未成年大鼠睾丸支持细胞以形成细胞复合物(Sertoli-islet cell aggregates，SICA)，并对SICA的形成条件和分泌功能进行研究. 方法:采用结扎灌注消化法及Dextran不连续密度梯度法获得纯化胰岛，并通过DTZ和AO-PI染色对其进行鉴定.采用消化分离法获得大鼠睾丸支持细胞，低渗处理除去精细胞，并Fas-L抗体免疫组化染色检测其纯度.将2000IEQ纯化胰岛与1×107睾丸支持细胞在旋转壁式生物反应器中共培养5天.通过HE常规染色、免疫组化、透射电镜、扫描电镜观察细胞复合物的结构.通过葡萄糖刺激实验对SICA的生物活性进行检测. 结果:获得的胰岛纯度为96％，存活率94％，睾丸支持细胞纯度为95％以上.在共培养2小时后，胰岛与睾丸支持细胞已开始形成松散的三维球形复合物；培养5天后，复合物较为致密，结构稳定.在胰岛与睾丸支持细胞形成的复合物(SICA)中，胰岛细胞与睾丸支持细胞随机分布，对胰岛素抗体和Fas-L抗体染色呈阳性.SICA的葡萄糖刺激指数为1.45±0.2，而单独培养胰岛为1.2±0.1. 结论:胰岛与支持细胞形成的复合物中，睾丸支持细胞与胰岛细胞随机分布，并具有分泌胰岛素的生物学活性.