用大肠杆菌表达猪瘟病毒E2主要抗原区检测猪瘟抗体的ELISA方法的建立及初步应用

摘要

根据猪瘟病毒株广东流行株序列,设计一对引物,并以包含E2全基因组的重组质粒pMD-E2为模板,扩增出含E2基因的主要抗原区域(360bp),回收PCR产物,将其克隆入pET-Trx的BamHⅠ和NheI位点间,构建原核表达质粒pET-E2,阳性重组质粒转化E.coliBL21(DE3)plyS,进行原核表达.表达蛋白质有少部分是以可溶形式存在,利用镍离子金属整合亲合层析法对可溶部分进行纯化.结果获得了纯度达90％以上的表达产物.以纯化的猪瘟病毒E2多肽为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗猪IgG为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的ELISA方法.经检测筛选出最佳反应条件为:0.8～1.6ug/ml纯化的E.coli表达的E2重组蛋白包被酶标板,用5％的小牛血清进行封闭,血清100倍稀释.试验表明应用重组E2蛋白作为诊断HCV抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。