犬新孢子虫NcSRS2基因的亚克隆与融合蛋白的表达

摘要

本研究根据NcSRS2基因序列设计合成一对引物,将上、下游引物分别引入EcoRI,XhoI酶切位点,用PCR技术从pGEX-4T-NcSRS2重组质粒扩增编码NcSRS2的基因片段,插入到pGEX-6p-1质粒的多克隆位点,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,于氨苄青霉素阳性LB培养平板上筛选阳性克隆,酶切及PCR鉴定;经IPTG诱导在E.coli中表达,用SDS-PAGE分析表达产物并纯化.结果表明,NcSRS2基因体外扩增产物与预期值相符,约1047bp;所构建pGEX-6p-NcSRS2重组质粒阳性克隆经双酶切与PCR鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE显示,表达融合蛋白产物约为62.6kD,表达效率为32.3﹪;表达的融合蛋白易于纯化.