FGFR1DN对BMSCs成骨诱导培养后的矿化影响

摘要

目的：探讨FGFR1DN对骨髓间充质干细胞(BMSC8)成骨诱导培养后成骨矿化的影响。方法：真核表达质粒pcDNA3.1(+)-DNFGFR1、pcDNA3.1(+)-FGFR1转染第3代BMSCs,证实转染成功后,待细胞处于对数生长期时进行成骨诱导培养,检测ALP的活性,定性检测采用免疫组化方法,定量检测采用细胞内ALP(cALP)试剂盒。连续培养21 d后观察矿化结节形成情况并行茜素红染色,然后根据茜素红浓度标准曲线计算矿化物质的量。实验分组:fgfr1-dn转染组,fgfr1转染组,pcDNA3.1(+)空载体转染组和未转染组。结果：与诱导培养7d比较,fgfr1-dn转染组BMSCs成骨诱导14 d后ALP活性明显增高(P＜0.05),peDNA3.1(+)空载体转染组和未转染组在成骨诱导14 d时ALP活性也增高(P＜0.05),但没有fgfr1-dn转染组增高明显,且两组比较无明显差异(P＞0.05)。fgfr1-dn转染组活性最高,fgfr1组活性最低(P＜0.05)。连续成骨诱导21 d后,肉眼可见孔底圆形不透明钙化结节,经茜素红染色后呈红色,BMSCs转染fgfr1-dn后在对数生长期经成骨诱导培养,其成骨能力明显增加,而fgfr1转染组成骨能力减弱。茜素红浓度含量fgfr1-dn组最高,fgfr1组最低,pcDNA3.1(+)空载体转染组和未转染组介于二者之间(P＜0.05)。结论：fgfr1-dn在BMSCs分化的早期可以促进细胞增殖,于对数生长期进行骨诱导培养后实现了其在成骨细胞中促进矿化的作用,这就为局部基因治疗骨折骨缺损提供了理论依据。