庆大霉素对人肾小管上皮细胞毒效应及肾损伤分子-1的影响

摘要

目的：观察庆大霉素对人肾小管上皮细胞(HK-2)的毒性效应,并研究庆大霉素损伤的肾小管上皮细胞中肾损伤分子-1(KIM-1)的分泌特点,对KIM-1在体外肾损伤早期预测中的意义进行探讨.方法：以0.00,1.25,2.50,5.00,10.00,20.00,40.00,60.00 mmol·L-1庆大霉素作用于体外培养的HK-2细胞株,倒置相差显微镜观察给药24 h后细胞形态,细胞增殖检测试剂盒(MTS)检测庆大霉素细胞毒性,AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡,底物显色法监测培养上清液中N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的释放,酶联免疫吸附(EHSA)法检测培养上清液中KIM-1的分泌.结果：庆大霉素对HK-2细胞增殖有抑制作用,抑制强度呈浓度依赖性,半数抑制浓度(IC5.)为(19.36±0.66)mmol·L-1;细胞经AO/EB双重染色可见:庆大霉素处理组早期凋亡细胞多于阴性对照组,随着庆大霉素作用浓度增加,早期凋亡细胞数量增加,晚期凋亡细胞和死亡细胞也增多.培养上清液中NAG和KIM-1的分泌呈不同变化规律;细胞上清液中NAG活性与庆大霉素浓度正相关,10.00,20.00,40.00,60.00mmol·L-1庆大霉素处理组与阴性对照组比较均差异有统计学意义(P＜0.05);随着庆大霉素作用浓度的增加,细胞上清液中KIM-1的分泌先升高再降低β,1.25mmol·L-1庆大霉素诱导KIM-1的分泌最显著,诱导效果逐渐下降.同阴性对照组相比,1.25,2.50,5.00 mmol· L-1庆大霉素组细胞分泌KIM-1均有显著升高(P＜0.05),而20.00,40.00,60.00mmol·L-1庆大霉素组细胞分泌KIM-1却有所下降.结论：与传统肾损伤指标NAG相比,KIM-1可以在更低的药物浓度作用下即出现显著性变化,说明其在肾损伤评价中具有更高的敏感性和特异性.在新药研发早期,选用体外细胞模型,通过研究KIM-1分泌水平对药物的潜在肾毒性进行早期筛选可能是一种更加经济且高通量的筛选方法.