胎球蛋白结合ELISA检测无细胞百日咳疫苗中活性PT方法的建立

摘要

目的:建立检测无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine, APV)中活性百日咳毒素(pertussis toxin,PTx)的胎球蛋白结合ELISA方法。方法:已知PTx能和胎球蛋白结合,而百日咳类毒素(pertussis toxoid,PTd)结合能力很低,将胎球蛋白包被96孔板后,再利用多克隆抗体进行检测。并研究胎球蛋白包被浓度、抗原孵育温度、样品稀释液的pH值和离子浓度等因素对PTx/PTd和胎球蛋白结合的影响,并对实验步骤进行优化,最后将此方法应用于APV中,对残余PTx进行检测。结果:在胎球蛋白包被浓度为5μg/ml,抗原孵育温度为37℃,使用无盐的pH为8.5的含1％胎牛血清白蛋白(BSA)Tns样品稀释液时,建立的胎球蛋白结合ELISA方法剂量反应曲线线性良好,特异性强,灵敏度高。并且发现直接用抗PT的酶标抗体进行检测,也能得到上述结论,简化了试验步骤。用此方法检测不同批次的APV疫苗,差异明显,重复性好。结论:胎球蛋白结合ELISA的方法可用于APV中残余PTx检测。