不同胶原包被条件对血管性血友病因子胶原结合法测定FⅧ制品中血管性血友病因子的影响

摘要

目的:通过考察不同胶原包被条件对vWF与胶原的结合的影响,建立一种灵敏度高、重复性高的vWF: CBA法用于检测FⅧ制品中的vWF活性.方法:将胶原Ⅲ分别按以下4组不同条件包被:不同PH (2.8,4.0,5.2,6.4,7.4,8.8,9.6)的缓冲液,不同盐浓度(0,0.05,0.1,0.15,0.2,0.3,0.4,0.6M NaCl)的缓冲液,不同浓度(5,2.5,1,0.5,0.25,0.125μg/ml)的胶原Ⅲ,不同温度(4℃℃,25℃℃,37℃℃),以5个不同稀释度的vWF标准品为样品,进行vWF:CBA测定,每种包被条件下得到一条标准曲线,根据标准曲线的相关系数和斜率考察每种包被条件下vWF与胶原的结合的效率.在每个不同包被条件下,同一样品,重复6次测定,根据变异系数考察每种包被条件下实验的重复性.对经过优化包被条件的vWF:CBA法进行特异性,稳定性和标准曲线范围的考察.结果:胶原Ⅲ溶解于含0.15M NaC1,PH7.4的磷酸缓冲液中,以1μg/ml,4℃条件下包被时,vWF与胶原的结合的效率较高.将优化包被条件的vWF:CBA法用于测定FⅧ因子制品中的vWF活性,具有很好的特异性、重复性、灵敏度.