油茶ISSR反应体系建立及优化

摘要

以改进的CTAB高盐法提取油茶嫩叶总DNA,进行简单重复序列间扩增(ISSR)分析,分别测试了退火温度、模板DNA浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量和是否加入去离子甲基酰胺对反应结果的影响、确定了油茶ISSR分析的最适反应体系:在20ulPCR反应体积中,含20ng模板DNA,2.5 mmol·L-1Mgcl2,0.2mmol·L-1dNTPs,1UTaqDNA聚合酶,0.5pmol·ul-1引物,％ 1Formamide deionized.扩增程序为:94℃预变性2min;94℃变性30s,52℃退火30s,72℃延伸90s,反应38个循环;最后在72℃延伸7min.