猪细环病毒1型实时定量PCR检测方法的建立

摘要

为定量检测猪细环病毒1型(TTSuV1),建立了检测TTSuV1核酸的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法。构建含有TTSuV1基因249 bp片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR GreenⅠreal-time PCR,来建立定量检测TTSuV1核酸的标准曲线与直线回归方程。结果显示,该方法的线性关系良好,相关系数达0.999以上;最低可检测到至少6.3×101拷贝/μL的核酸模板;重复性试验的变异系数小于2％;对TTSuV2、猪圆环病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等常见猪源病毒均检测不到荧光信号;对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于TTSuV1的检测与定量分析。