基于LNA探针的两重实时荧光RT-PCR检测方法甄别新城疫中强毒株与弱毒株

摘要

新城疫强毒株是各国重点防控的重大动物疫病,对其的快速诊断和检测是防控新城疫暴发的前提和基础。为了建立基于新型LNA探针的实时荧光RT-PCR检测方法鉴别诊断新城疫中强毒株和弱毒株,设计了两条针对新城疫F基因裂解位点的新型LNA探针,通过对11株新城疫病毒株进行检测,建立了两重实时荧光RT-PCR检测方法来同时鉴别诊断新城疫的中强毒株和弱毒株方法。并与副粘病毒Ⅰ型(APMV-1)和新城疫中强毒株(vNDV)taqman实时荧光RT-PCR检测方法进行了灵敏度和特异性比较。结果显示所建立的双重LNA探针RT-PCR实时荧光方法与美国农业部推荐的Taqman实时荧光RT-PCR检测方法之间的灵敏度相差10倍,扩增效率也有一定的差距,但特异性较好。所建立的LNA探针两重实时荧光RT-PCR方法中,中强毒株探针的扩增扩增效率明显高于弱毒株探针方法的扩增效率。