Piwil1基因在鸡PGCs中的体外抑制研究

摘要

本文通过对鸡的试验研究，在倒置显微镜下观察，刚分离到的单个PGC较体细胞大，细胞质中含有球状的卵黄颗粒和脂滴。培养24 h后，可见单个PGC已经贴附在饲养层上，但细胞间结合不紧密，细胞之间排列疏松、界线较明显。PAS染色结果表明，单个PGC细胞胞质为紫红色。在倒置显微镜下观察，培养24 h后，可见单个SSC细胞呈光亮圆形，杂细胞极少，纯度较高。SSEA-1鉴定结果表明，SSCs集落呈阳性，在荧光显微镜下发出绿色荧光。利用瑞士一吉姆萨染液对分离纯化后的鸡攀丸精原(母)细胞进行染色，在倒置显微镜下观察，可见细胞核被染上蓝紫色，胞质呈淡紫色。其中，胞核较大，约占细胞3/4体积的为精原(母)细胞;细胞体积较小的为精细胞。Real-TimeqPCR结果表明，与PGCs相比，Piwi11基因在精原和精母细胞中的表达量较高，在SSC、中的表达量次之。Real-TimeqPCR结果显示，与阴性对照组相比，转染shRNA干扰质粒各组中Piwill基因的mRNA表达量分别为0.81,0.64和0.91，那么相应的干扰效率分别为19%,36%和9%。由此可见，siR2质粒的干扰效果最好，siRl质粒的干扰效果不明显，siR3质粒无干扰效果。在最佳干扰效果下，与对照组相比，CRl-B转座子的2个ORFsmRNA表达量均降低，CR1-F转座子的ORF1 mRNA表达量升高，ORF2 mRNA表达量变化不明显。