蓝舌病病毒3型VP2蛋白单克隆抗体制备

摘要

目的:利用重组表达的BTV3-VP2蛋白制备的单克隆抗体,拟建立BTV3型特异性诊断方法。方法:从感染BTV3的BHK-21细胞上清提取病毒RNA,经RT-PCR扩增L2基因,并将该基因分别克隆至原核表达载体pMAL-C4X和真核表达供体质粒pFast-BacHTA载体上。获得的重组质粒分别用于原核和真核表达,从而获得VP2蛋白。以原核表达的重组VP2蛋白作为免疫原免疫5-6周龄BALB/c小鼠,通过体外细胞融合技术将SP2/0骨髓瘤细胞与免疫后BALB/c小鼠的脾细胞进行融合。以真核表达的重组VP2蛋白为检测抗原,通过间接ELISA方法筛选出2株能稳定分泌VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果:已获得2株能稳定分泌VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。结论:上述结果有利于进一步了解BTV8 VP2蛋白的抗原结构及其在免疫应答中的作用,为中国BTV3的鉴别诊断方法的建立奠定了基础,并可采用PepScan技术进行抗原表位分析,深入研究蛋白质的抗原表位对于疾病的诊断、治疗、疫苗的开发等具有重要的意义。