重组人α-防御素-3基因乳腺定位表达及抗菌效果检测

摘要

目的：探讨减毒沙门氏菌介导的人HNP-3乳腺定位表达产物对革兰氏阴性菌的抗菌效果.方法：将构建的乳腺定位表达载体pEGFP-WAP-HNP-3经电转化导入减毒沙门氏菌ΔcrpC78-1,构建重组菌ΔcrpC78-1(pEGFP-WAP-HNP-3),将重组菌分点注射到怀孕后20～22d 母兔腹部乳腺分布区,收集兔分娩后不同时间的泌乳,Western blot检测乳中HNP-3表达情况,ELISA 检测乳中HNP-3表达水平,活菌计数法检测泌乳中HNP-3的抑菌效果.结果：乳汁中在40 kDa处有HNP-3阳性杂交信号,母兔分娩后第5d HNP-3表达量最高,可达289 ng/ml,及至第25 d表达量仍可达到136ng/ml.血清和阴性对照乳中未检测到HNP-3.活菌计数法结果表明含HNP-3的兔奶对大肠杆菌、沙门氏菌和绿脓杆菌有较好的抑菌效果,抑菌率分别为92.8％、42.0％和21.3％;结论：减毒沙门氏菌介导的人HNP-3乳腺定位表达产物对革兰氏阴性菌具有抑菌效果,为动物乳房炎的预防及新一代抗菌药物的研发提供了新思路.