大鼠β-防御素-2的重组表达及抗菌活性检测

摘要

目的 构建大鼠β-防御素-2(rBD2)基因的真核表达载体pCAGG-rBD2,并转染小鼠纤维母细胞(L929),为解决细菌耐药性问题提供进一步的实验基础.方法 以大鼠肺组织总RNA为模板,采用RT-PCIL的方法获得β-防御素-2基因cDNA,将其克隆到pGEM-T Easy载体并构建含有目的 片段的真核表达载体pCAGG-rBD2,经脂质体介导转染L929细胞,通过RT-PCR和Western blotting检测目的 基因表达情况.结果 成功克隆并构建了合有目的 基因rBD2的真核表达载体pCAGG-rBD2,转染pCAGG-rBD2的细胞中检测到了rBD2基因在转录水平和蛋白水平的表达,其细胞培养的上清液对金黄色葡萄球菌具有杀灭作用.结论 防御素在真核表达系统的成功表达,为进一步开发高效能杀灭耐药性致病微生物的多肽类新药提供实验基础和理论依据.