纳米载体转染细胞的研究

摘要

纳米材料可使吸附目的基因形成纳米基因复合物，通过内吞或吞噬作用进入细胞质，属于非病毒型基因载体系统，具有易于制备和安全性高等特点。本研究利用纳米材料作为载体探索转基因技术，克隆并构建表达载体pLEX-GFP。利用MgCIZ,AICI,NaOH三种化合物制备直径约100nm呈六边形双层片状结构的Mg2A1-Cl-LDH纳米颗粒。以纳米颗粒Mg2A1-Cl-LDH结合pLEX-SOX2-GFP转染HEK 293T，流式细胞仪检测GFP荧光信号评估转染效果。优化后的转染条件是:质粒DNA与LDH共孵育的时间在15分钟是转染效率最高(6.93%);质粒DNA与LDH的质量比为4:50时转染率最高(11.17%)。纳米材料浓度与转染效率呈正比，但同细胞的存活率呈反比，在200gg/ml为最佳浓度，细胞存活率最高(87%)，转染后的培养时间24小时时转染率最好(17.4%)。转染质粒在细胞内均有明显的绿色荧光蛋白的表达，说明该转染方法可靠，表达能力强。