手性衍生化结合HPLC-ESI-Q/TOF-MS测定缩宫素中氨基酸的D,L-构型

摘要

目的：建立基于手性衍生化结合HPLC-ESI-Q/TOF-MS技术测定缩宫素中氨基酸的D,L-构型的方法. 方法：缩宫素在6mol/L氘代盐酸的重水环境中经110°C水解8h后,中和,水解后的氨基酸与手性Marfey's试剂——Nα-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L-丙烯酰胺(FDAA,Marfey's试剂)在40°C水浴环境中进行衍生化反应.衍生化后的氨基酸转化为非对映体,采用反相色谱柱经Agilent1260-6550Q/TOF-MS液质联用仪分离测定. 结果：缩宫素中7种衍生后的D,L-氨基酸均可被良好的分离,经添加D-氨基酸后确定其检测限,并折合为该D-氨基酸取代的杂肽即差向异构体肽的量,差向异构体肽的检测限及定量限分别在0.0061％～0.10％及0.020％～0.34％之间.缩宫素样品中除D-谷氨酰胺差向异构体肽外,其他均在检测限以下. 结论：本方法可以快速、高灵敏度地确定出缩宫素中氨基酸的构型,为多肽类药物的质量控制提供了一种新的解决思路.