基于杂化亲水填料富集的蛋白质糖基化修饰研究新策略

摘要

为了进一步增强糖肽在HILIC填料表面的保留能力，首先利用SI-ATRP反应制备了pPEGMA-SMs杂化填料，填料表面高度覆盖的亲水聚合物增强了与糖肽的相互作用，结合糖苷酶酶切实现了对健康人尿液中O-GlcNAc糖基化修饰肽段的规模化鉴定，共鉴定了457个O-GlcNAc糖基化修饰蛋白的474个O-GlcNAc糖基化修饰多肽，获得了首个人尿液蛋白O-GlcNAc糖基化数据集。但利用亲水作用保留糖蛋白／糖肽的单一富集方式，很难满足具有复杂糖型糖肽或具有多个疏水性氨基酸糖肽富集的需求。进一步利用原子转移自由基反应制备了具有嵌段模式的亲水聚合物修饰的固相萃取填料，该填料表面由兼性离子、N-乙酰葡萄糖胺、甘露糖三嵌段聚合物链高度覆盖，利用聚合物各单元各自的特性与糖链相互作用，分别保留糖肽，实现了小鼠肝脏糖基化的规模化富集鉴定，与单一的亲水组分富集相比，鉴定数量提高了65%-120%。