锦鲤疱疹病毒(KHV)保存方法的筛选与比较

摘要

探讨合适的锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus KHV)保存方法,促进KHV流行病学调查与防控以及疫苗开发等相关工作的开展.方法比较了5种不同保存条件对锦鲤疱疹病毒的影响,包括1):-80℃超低温保存;2):液氮超低温保存;3):50％磷酸甘油缓冲液保存;4):乙醇保存;5):异丙醇保存.结果表明5种方法保存的患病锦鲤组织利用PCR检测都为阳性;组织匀浆后感染健康锦鲤,保存在50％磷酸甘油缓冲液、乙醇和异丙醇的患病组织失去了感染能力,而保存在-80℃超低温冰箱和液氮中的组织均可以使健康锦鲤感染KHV;将5种保存方法保存的组织匀浆后感染CCB细胞,只有保存在50％磷酸甘油缓冲液中的患病鱼组织可以感染CCB细胞.此外,将细胞病毒液存放于4℃冰箱、20℃冰箱中病毒感染力(TCID50/0.1mL)显著下降(P＜0.05),而将病毒液存放于-80℃超低温冰箱、液氮中病毒的感染力无明显差异(P＞0.05).可以利用-80℃超低温、液氮超低温长期保存患病组织病料和细胞病毒液,而保存在50％磷酸甘油缓冲液的组织病料有利于进行病毒的细胞分离.