黄腐酚诱发活性氧研究的细胞模型解析

摘要

利用细胞模型进行活性氧(ROS)机制研究是体外ROS研究的重要手段.尤其是进行化合物诱发ROS相关机制研究中,细胞水平的工作常常是相关研究的首要内容.我组在黄腐酚诱发ROS机制研究中发现,随着黄腐酚处理浓度超过10μM,HL-60细胞内ROS水平反而出现急剧的下降.针对这一现象,通过分析流式细胞术数据、台盼蓝排染法细胞计数、乳酸脱氢酶活性变化和扫描电子显微镜观察细胞形态,发现研究体系中的血清浓度对检测到的ROS水平具有非常大的影响,而且血清浓度同样严重影响到体系中细胞的状态.在无血清体系里,10、20和40μM黄腐酚处理1小时,均造成了严重的细胞死亡和碎片化.在10μM黄腐酚作用下,体系中1％的血清造成检测到的ROS水平下降约25％,2％的血清造成检测到的ROS水平下降约70％,而3％的血清已基本掩盖了ROS的生成,测得的ROS含量仅为无血清体系的约7％,4％～10％的血清则完全掩盖了ROS的生成.分析流式数据发现,1％到4％血清的存在能明显降低细胞碎片化的情况.可见,研究体系中一定浓度的血清在保护细胞状态的同时,却对ROS的检测产生严重的影响.权衡利弊,我们认为如果需要检测化合物处理12小时以上导致的ROS变化,则必须考虑细胞的状态,以一般细胞培养条件(10％血清)为宜;而检测短时间(如1小时)化合物作用导致的ROS变化,则应以真实反映ROS生成情况为主,选择无血清体系,具体的化合物实验浓度则依据剂量关系结果选择最大ROS生成时的浓度为合适的处理浓度.