活血及活血解毒配伍中药对TNF-α诱导入内皮细胞与中性粒细胞黏附的影响

摘要

目的:探讨活血及活血解毒配伍中药含药血清对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)与外周血中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)黏附率、炎症反应及相关通路蛋白的影响. 方法:大鼠32只,随机分为空白对照组、活血(芎芍胶囊)组、解毒(黄连胶囊)组和活血解毒(芎芍胶囊+黄连胶囊)组,各药物组按临床等效剂量的10倍灌胃,空白对照组予等体积蒸馏水作对照,1次/日,连续7日,末次给药后1h,采血制备含药血清.以TNF-α为刺激物,造成HUVECs细胞损伤模型.以10％含药血清干预24h后收集细胞,应用孟加拉玫瑰红染色法观察HUVECs与PMN发生病理性黏附情况,酶联免疫法观察细胞上清液相关炎症因子E选择素(E-selectin)、细胞黏附分子-1(ICAM-1)及白介素-1β(IL-1β)的含量.Westernblot法观察丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白磷酸化水平改变. 结果:与空白对照组比较,模型组细胞出现明显的氧化损伤.与模型组比较,活血含药血清、解毒含药血清及活血解毒含药血清均能有效抑制HUVECs与PMN的黏附(P＜0.05),显著提高细胞培养上清液E-selectin、ICAM-1和IL-1β(P＜0.05,P＜0.01)的水平,显著降低内皮细胞p-p38MAPK、p-ERK1/2、(P＜0.05,P＜0.01)蛋白的表达. 结论:活血及活血解毒含药血清能减轻TNF-α诱导的HUVECs损伤,抑制HUVECs-PMN黏附和黏附因子释放,其机制可能与调节内皮细胞MAPK通路p38MAPK、ERK1/2蛋白磷酸化水平有关.