鼠skMLCK多肽抗体的制备与鉴定

摘要

为制备鼠骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(Skeletal muscle myosin light chain kinase,skMLCK)多肽抗体,本研究根据NCBI GenBank中报道的skMLCK的一级结构信息,利用TMHMM2.0和DNA Star软件分析此蛋白的跨膜结构域、二级结构、亲水性、疏水性等,以及综合分析考虑抗体设计的其他相关因素,设计出一段14个氨基酸的多肽.将合成后的多肽同牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)进行偶联,将BSA偶联后的skMLCK多肽免疫新西兰大白兔,3个月后采集血清,亲和纯化抗skMLCK多肽抗体.ELISA法检测效价,Western blot和免疫荧光法检测抗体特异性,结果得到了高效价和高特异性的鼠skMLCK多肽抗体,ELISA法测定其效价可达到1∶128000,并可用于免疫荧光和western blot的研究,为后续研究skMLCK基因提供物质基础.