建兰MYC2与花香基因AOC启动子的结合及其与COP1的互作关系

摘要

建兰因其优雅的花姿和浓郁的芳香而备受人们喜爱,前期研究表明,建兰花香物质主要为茉莉酸甲酯(MeJA),其生物合成是通过十八烷途径完成的,丙二酰氧化环化酶(AOC)是MeJA合成的关键酶之一,对其进行转录调控和蛋白互作研究有助于阐明建兰花香释放的分子机理.本研究以建兰'小桃红'为材料,用染色体步移法克隆获得了CeAOC的启动子序列643bp,应用PLACE网站对其顺式作用元件进行在线预测,结果表明除具有启动子区的基本特征外,还分别在+219bp和+480bp处有两个G-box(5'-AAACGTGT-3')元件.通过RT-PCR技术,克隆了转录因子CeMYC2全长,cDNA序列长1509bp,编码503个氨基酸,具有典型的bHLH结构域.分别构建pAbAi-pAOC诱饵载体和pGADT7-MYC2酵母表达载体并进行酵母单杂交,结果表明CeMYC2可以和CeAOC的启动子区相结合.克隆了组成型光形态建成基因COP1的cDNA序列,全长为2073bp,具有环形锌指结合域和WD-40重复序列,构建酵母诱饵载体pGBKT7-COP1,并与pGADT7-MYC2进行酵母双杂交,结果表明CeCOP1和CeMYC2能产生互作.分别对CeMYC2和CeCOP1构建GFP瞬时表达载体,转化洋葱表皮细胞,结果表明均定位于细胞核;通过双分子荧光互补(BIFC)实验进一步验证了CeMYC2和CeCOP1能在洋葱表皮细胞核中互作.实验结果为进一步研究CeMYC2对建兰花香茉莉酸甲酯的释放及其下游基因的转录调控奠定了基础.