青黛及其单体靛玉红对UC大鼠通透性影响的体内外研究

摘要

目的：研究青黛及其单体靛玉红对溃疡性结肠炎(UC)体内、体外炎症模型通透性的影响. 方法：体内实验：将40只SPF级SD大鼠按照体重随机分为4组：正常组(C)、模型组(M)、青黛组(Q)、清肠栓组(QCS).通过自由饮用5％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液6天,诱导体内溃疡性结肠炎模型,并予青黛、清肠栓连续灌肠治疗7天.DAI评分评估大鼠一般情况,显微镜下观察各组大鼠HE染色后结肠组织,微板荧光分光光度计检测各组大鼠异硫氰酸荧光索(FD4)透过率,免疫荧光检测各组大鼠结肠组织中紧密连接蛋白ZO1、Occludin表达情况.体外实验：取SPF级SD大鼠分离原代结肠组织黏膜上皮细胞,将细胞分为4组：正常组(C)、模型组(M)、靛玉红组(D)、美沙拉嗪组(A).以脂多糖(LPS)刺激大鼠原代结肠黏膜上皮细胞24h诱导体外炎症模型.同时用药干预组分别加青黛单体成分靛玉红、美沙拉嗪(5-ASA).采用Transwell小室检测各组细胞单层模型跨膜电阻值(TEER);微板荧光分光光度计检测各组细胞异硫氰酸荧光素(FD4)透过情况;免疫荧光检测各组细胞间紧密连接蛋白ZO1表达情况;罗丹明-鬼笔环肽染色观察各组细胞的微丝结构. 结果：体内实验：(1)一般情况显示：5％DSS自由饮用6天可以成功诱导出腹泻、便血、体重下降的溃疡性结肠炎模型.模型组与正常组相比,DAI评分显著升高,镜下结肠粘膜损伤严重.用药干预后,青黛组、清肠栓组与模型组相比能明显减少大鼠DAI评分,并改善大鼠结肠粘膜镜下表现.(2)FD4检测显示：模型组与正常组相比FD4透过率明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).用药干预后,青黛组、清肠栓组与模型组相比FD4透过率明显降低,其中以清肠栓组最为显著,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)免疫荧光显示：模型组与正常组相比结肠组织中的紧密连接蛋白ZO1、Occludin均明显下调.用药干预后,青黛组、清肠栓组与模型组相比有所上调,基本接近正常组水平.体外实验：(1)大鼠结肠粘膜上皮原代细胞培养后可形成致密的单层结构,LPS干预的模型组与正常组相比TEER值明显下调,差异有统计学意义(P＜0.01).用药干预后,靛玉红组、西药5-ASA与模型组相比,TEER值明显上调,差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)2.FD4检测显示：模型组与正常组相比FD4透过率明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).用药干预后,靛玉红组、5-ASA与模型组相比明显下调,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)免疫荧光显示：模型组与正常组相比细胞间紧密连接蛋白ZO1的表达明显下调,荧光染色暗淡.用药干预后,靛玉红、5-ASA组与模型组相比均可见紧密连接蛋白ZO1表达上调.(4)F-actin染色显示：模型组和正常组比较微丝破坏严重,结构错乱稀疏.用药干预后,靛玉红组、5-ASA组与模型组相比结构排列得到明显改善,轮廓相对清晰,其中以5-ASA组改善最为明显. 结论：综上结果表明,1.青黛能有效减轻DSS诱导溃疡性结肠炎的结肠炎症反应,修复粘膜损伤,对大鼠肠道通透性具有正向调节作用2.青黛单体靛玉红能减轻LPS诱导的SD大鼠结肠黏膜上皮原代细胞炎症反应,调整紧密连接蛋白ZO1及微丝结构,在维持单层膜的完整性及通透性上效果与西药5-ASA相当.