在毕赤酵母中高分泌表达的甲基对硫磷水解酶基因突变体的构建

摘要

通过采用DNA shuffling技术对甲基对硫磷水解酶基因(Methyl organophosphorus hydrolase,MPH)DNA,用DNA酶Ⅰ进行随机切割,获得较小的DNA片段混合体,并以此进行体外改造,获得了突变基因以及改组文库和改组子序列信息,为下一步筛选预期突变体提供了原材料和技术基础.该技术克服了模板来源、丰度、消化、改组等多个技术上的难点,通过反复试验和改进体系,不仅在高度同源的基因之间实现了体外改组,在中度同源的序列片段之间也完成了改组实验,并且取得了多个成功引入突变的改组子.因此,这一技术和项目圆满的完成了预期的项目目标,并为下一步大规模筛选奠定了必备的基础,同时为新功效的生化洗消用酶研发和拓展提供了有效的技术储备。