海水鱼弧菌病二联灭活疫苗生产工艺研究

摘要

目的:确定海水鱼弧菌二联灭活疫苗原液生产工艺.rn 方法:采用摇瓶培养和发酵培养弧菌,测定不同培养时间的菌液浊度和活菌数,添加不同浓度的甲醛进行灭活检验.rn 结果:摇瓶培养时,培养液18h后进入生长稳定期,20-24h达到生长最大值,24h后进入生长衰减期;消泡剂泡敌对弧菌生长有一定的影响,添加量不超过0.2mL/L为佳.经SL、50L、500L发酵罐培养时,280C,培养lOh即达到生长稳定期,培养12-14h左右,菌液活菌数达到最大值,500L发酵罐可达2.33xI010CFU/mL;发酵培养时,以培养基初始pH7.5,发酵过程不再控制为佳.福尔马林对弧菌的最低抑制生长浓度为0.025％,弧菌培养液添加0.3％的福尔马林,28℃,24h可完全灭活.rn 结论:初步确定弧菌二联灭活疫苗原液生产工艺流程:弧菌菌株接种TSB,28℃,摇瓶培养18-20h,接种种子罐,28℃,搅拌通气培养12h,接种发酵罐,28℃,搅拌通气培养12-14h,加入0.30％甲醛液,28℃,24h完全灭活,得到合格的弧菌灭活疫苗原液.