猪巨细胞病毒的基因组结构与分子特征

摘要

猪巨细胞病毒( porcine cytomegalovirus,PCMV)是一种以引起仔猪包涵体性鼻炎为主要特征的β疱疹病毒,幼龄猪群感染的死亡率可达25％.PCMV感染分布广泛,主要呈潜伏性感染,对养猪生产具有一定的危害.在ICTV第九分类报告中,PCMV仍划为β疱疹病毒亚科的未定属,主要是由于迄今尚无该病毒的全基因组序列.本研究对PCMV分离毒株进行了全基因组序列测定,分析了病毒的基因组结构与分子特征,以期为PCMV的分类提供科学依据.采用PCR技术,对2006-2010年收集自我国14个地区49个规模化猪场的812份肺组织病料进行了PCMV检测.结果表明,共检出317份阳性样本,PCMV阳性率为39.04％;猪场阳性率为97.96％0对随机选取的142份阳性扩增产物进行了测序,并与国外参考毒株序列进行比对.结果表明,扩增产物的核苷酸序列同源性为97.6％-100％,推导的氨基酸序列同源性为95.6％-100％.遗传演化分析显示,我国PCMV主要分属于亚群2和亚群3.将PCR检测为PCMV阳性的猪肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophages,PAMs)与PT-K75细胞共培养,成功分离到1株PCMV,命名为BJ09.在PT-K75细胞上,该毒株感染可偶见合胞体和巨细胞病变.经透射电镜可见典型的PCMV粒子.用PT-K75细胞培养PCMV BJ09,提取病毒基因组DNA,用高通量测序方法对BJ09毒株全基因组序列进行了测定,并分析了该毒株的基因组特征.结果表明,PCMV BJ09的基因组全长为128367 bp,预测的编码基因有79个;其中,69个基因与HHV-6A、HHV-6B和HHV-7具有同源性,2个基因与其它β疱疹病毒有同源性,而其余8个基因为PCMV特有;PCMV与HHV-6A、HHV-6B和HHV-7同源基因的氨基酸同源性相对较高,且基因方向和位置均一致;PCMV基因组结构为DR-U-DR形式,与HHV-6A、HHV-6B和HHV-7相同;对PCMV核心基因的演化分析表明,PCMV与HHV-6A、HHV-6B和HHV-7处于同一分支.综上结果表明,PCMV可以作为一个新成员,归类于β疱疹病毒亚科的玫瑰疹病毒属.