半滑舌鳎新型膜孕激素受体基因分子特征及其在卵巢发育过程的作用

摘要

采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,首次获得全长为2002bp的半滑舌鳎新型膜孕激素受体(mPR-like)的cDNA序列;二级结构分析表明其氨基酸序列编码的蛋白存在7个跨膜区域;三级结构分析表明该蛋白有多个结合位点.使用MEGA4.0临位相联法和Clustal X方法对mPR-like的氨基酸序列进行聚类分析和序列相似度分析,发现半滑舌鳎mPR-like与青鳉和三刺鱼的mPR-like聚为一支,亲缘关系较近,相似度较高,分别为68％和72％.应用实时定量PCR方法分析了mPR-like mRNA表达情况:发现mPR-like mRNA在性成熟雌性半滑舌鳎不同组织表达具有广泛性,但表达量存在差异,在脑、卵巢、心、鳃、脾和胃等组织表达丰富;在不同发育阶段卵母细胞中,mPR-Like mRNA表达水平从Ⅱ时相卵母细胞到Ⅴ时相卵母细胞持续升高,而在Ⅵ时相卵母细胞的表达水平显著下降(P＜0.05);在半滑舌鳎繁殖周期的脑和卵巢组织中,mPR-Like mRNA的表达水平从性腺发育Ⅱ期到Ⅴ期持续升高并且在Ⅴ期达到最高峰(P＜0.05),Ⅵ期表达量开始下降;在半滑舌鳎繁殖周期的垂体组织中,不同繁殖期mPR-Like mRNA表达水平变化幅度不大,但在性腺发育Ⅴ期时垂体中的表达量显著高于其他繁殖期(P＜0.05).放射免疫测定的结果表明半滑舌鳎雌鱼血清中孕酮激素的含量变化在整个繁殖周期中差异显著(P＜0.05),在性腺发育Ⅳ期含量迅速升高并在Ⅴ期达到峰值.