鸡白细胞介素5酵母表达载体的构建及表达

摘要

白介素-5(interleukin-5,IL-5)是一种具有免疫调节功能的生物活性介质,IL-5在调节机体免疫功能,尤其是粘膜免疫方面起着十分重要的作用.目前鸡白细胞介素-5的研究相当滞后.本研究为了进一步探讨鸡IL-5结构与功能,在毕赤酵母细胞中表达IL-5基因。本试验成功构建了重组毕赤酵母菌株X-33/pPICZαA-IL5，并实现了鸡IL-5酵母表达。试验使用的巴斯德毕赤酵母是一种单细胞真核生物，具有生长快、易于工业化生产、遗传操作简单等原核生物的特性，还具有真核生物表达系统基因的表达调控、蛋白修饰、合理的空间折叠等功能，避免了产物活性低，包涵体变性、复性等问题，非常有利于真核基因的表达，能克服大肠杆菌表达系统缺乏蛋白翻译后加工，修饰的不足。本研究构建的酵母表达载体pPICZαA-IL5，获得外源基因整合到酵母染色体上的遗传稳定的重组子，表达的目的蛋白IL-5为糖基化蛋白，由SDS-PAGE胶可以看出目的蛋白的表达量较高，且杂蛋白较少。本试验设计时为了后期蛋白的纯化回收在外源基因后没有设计终止子而是使用表达载体上终止子，这样表达蛋白增加了HIS标签，加之白细胞介素5自身是高度糖基化蛋白所以蛋白分子量达到46KD左右高出预期大小。