比格犬α7干扰素成熟肽基因的克隆、原核表达及活性分析

摘要

本实验从比格犬的脾脏中扩增比格犬α7干扰素成熟肽基因并进行了原核表达和重组蛋白的活性测定，为比格犬α7干扰素的进一步生产和应用奠定了一定基础。本实验克隆的比格犬α7干扰素成熟肽基因与GenBank上发表的犬干扰素基因(NM001006654)同源性为100%。序列分析发现目的基因含有较多的大肠杆菌稀有密码子，将构建好的重组质粒pET 32a-CaIFN-α7转化至表达宿主中，确定最佳诱导条件，在BL21(DE3)中表达效果最好。经Bandscan软件分析目的蛋白约占菌体总蛋白含量的48.5%，表达产物以包涵体形式存在。纯化的pET-32a-CaIFN-α7融合蛋白活性为1.07×1O5U/mg，具有较好的抗病毒活性。