山羊痘病例的病理学诊断及病毒分离鉴定

摘要

2013年11月菏泽市某养羊场从散户购买青山羊50余只,购进后1周左右陆续发病,发病羊体温41-42℃,2周内死亡率超过60％,部分羊体表有痘疹样病变,疑似羊痘,对该病例进行了剖检、病理组织学检查及病毒分离鉴定.诊断结果表明,病羊眼睑、口、鼻部有痘疹结节,皮肤有大量红色丘疹.剖检肺、胃肠黏膜、肾及肝表面有数量不等的灰白色丘疹.病理组织学检查,皮肤及黏膜痘疹部上皮细胞增生、水泡变性,并见胞浆红染包涵体;肺、肝、肾丘疹完全符合痘疹的病变特征,通过Macehiavello 包涵体染色在皮肤、黏膜增生的上皮细胞及肝、肾痘细胞的胞浆内有紫红染包涵体.取肺、肾等组织器官的痘疹研磨液，接种初生羔羊睾丸细胞出现明显的细胞病变，接种9-11日龄鸡胚尿囊膜未出现痘斑，接种刚断奶小鼠未出现死亡。将获得p32基因序列与GenBank上登录的相应序列进行同源性分析表明该分离株与山羊痘病毒中国和越南分离株的同源性为99.5-99.8%，与印度和哈萨克斯坦分离株的同源性为99.4-99.5%，但与绵羊痘病毒的同源性偏低(97.2-98.1%).系统进化树分析表明该分离株与山羊痘病毒处于同一分支。将纯化后的p32基因扩增产物用HinfⅠ酶切位点分析表明，该病毒仅在688bp处存在1个酶切位点，酶切后产生两条目的片段。对p32基因序列进一步分析表明，在山羊痘病毒的169-171位点上存在3个碱基(GAT)的插入，而在山羊痘病毒和其他痘病毒中在该位点上缺失3个碱基，进一步地证明了此次疫情是由山羊痘病毒而不是绵羊痘病毒引起的。据病理学及病原学诊断结果判定该病例为山羊痘重症感染。按《中华人民共和国动物防疫法》规定，扑杀并无害化处理发病羊群，羊舍、场地、用具严格消毒，粪便堆积发酵处理，受威肋、区的羊群实施疫苗紧急接种羊痘疫苗，使疫情得到了有效控制。