PRRSV GP5蛋白抗独特型抗体的单链可变区片段(SFv)转导MARC-145后抑制PRRSV感染的研究

摘要

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种全球性猪传染病,已成为威胁世界养猪业的主要疫病之一.PRRSV感染宿主细胞是一个多步骤且需要多种细胞受体参与的过程.本实验室前期研究以免疫网络学说为理论基础,利用抗PRRSV GP5的独特型抗体Mab2-5G2找到了与PRRSV感染相关的一个新的受体-NMHCⅡA.本试验以Mab2-5G2杂交瘤细胞的mRNA为模板,通过RT-PCR技术克隆其VH和VL基因;构建表达抗独特型抗体Mab2-5G2的单链可变区片段(single-chain variable antibody fragment,SFv)的慢病毒真核表达载体并转导至PRRSV易感细胞系Marc-145中,经筛选鉴定后获得了稳定表达SFv的MARC-145,不同毒株(包括VR2332,SD16,BJ-4,JXA1,CH-1a,TA-4)感染后观察病毒复制增殖情况.Western blot、IFA和病毒滴定结果表明:与对照组细胞相比,不同PRRSV毒株N蛋白表达量及病毒滴度均出现不同程度的减少或下降.本研究结果证明SFv转导MARC-145后明显抑制PRRSV的增殖,提示NMHCⅡA在PRRSV感染中发挥重要作用.以上研究结果不仅丰富了对PRRSV与受体之间相互作用的了解,也为进一步探索和寻找潜在的抗PRRSV药物靶标提供了理论依据.