Marc-145细胞内表达GP5蛋白对PRRSV感染的影响

摘要

为了在体外研究GPS表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV易感细胞Mac-145的影响，本研究通过慢病毒介导成功构建稳定表达GP5蛋白的Marc-145细胞系;首先对该细胞系的细胞活性，细胞凋亡检进行了检测，结果显示GP5在Marc-145内表达并未影响细胞活性和诱导细胞凋亡;然后为了分析GP5蛋白表达对PRRSV感染的影响，利用不同致病性PRRSV毒株VR-2332,HP-PRRSV/JXA1,HP-PRRSV/SD 16分别感染高效表达GP5的Marc-145细胞，结果显示，GP5蛋白在Marc-145细胞内的预表达显著抑制了PRRSV的后续感染;为了明确对PRRSV感染的抑制作用是阻断了病毒的吸附还是抑制了病毒的复制，通过荧光定量PCR对病毒的吸附和病毒吸附后在细胞的复制进行了测定，结果显示GPS蛋白表达没有影响病毒对细胞的吸附，而是抑制了病毒在细胞内的复制，通过对1型干扰素基因转录水平和启动子活性进行分析，GP5的表达导致细胞内INF-β的mRNA水平显著升高，启动子活性明显增强。由此，GPS蛋白体外细胞内表达对PRRSV感染具有明显的抑制作用，这种抑制作用极可能是由GP5的表达诱导了细胞内INF-β的产生导致的。