白念珠菌烯醇化酶的分离及纯化

摘要

为分离及纯化白含珠菌烯醇化酶（Ｅｎｏｌａｓｅ），并测定其体外活力，根据白念珠的烯醇化酶的生化特点，以酶解法（ｌｙｔｉｃａｓｅ）破白念珠菌细胞壁，获全菌蛋白，然后采用５０℅和７５℅梯度硫酸铵沉淀法和ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ凝胶柱及ＤＥＡＤ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５凝胶柱等柱层板法从菌体蛋白中分离纯化烯醇化酶，在还原态进行十二烷基磺酸钠－丙烯酰胺凝脉电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），所测定的分子量为４７ＫＤ，从１５．５ｇ的白念珠菌孢子（湿重）中得５００ｍｇ的菌体蛋白，又从５００ｍｇ菌体蛋白中大约分离出３．７ｍｇ的酶，在体外模拟糖代谢反应链测定酶白的活力，根据反应链中单位时间ＮＡＤＨ转变为ＮＡＤ的量，推算出所分离的白念珠菌烯醇化酶的活力大约为２０Ｕ／ｍｇ。