Akt的PH结构域与其调节区结合

摘要

从人T细胞中克隆Akt的PH结构域及其调节区基因并进行6-his和GST融合表达,研究二者的体外结构情况,为进一步研究Akt的调节区在其分子激活中的作用打下基础.研究以RT-PCR的方法从人T细胞中扩增目的基因片段,测序证明序列正确.再将正确的目的基因片段定向克隆到表达载体pRSET-A和pGEX-4T-1中.以IPTG诱导获得Akt的PH结构域及其调节区与6-his和GST的融合表达,重组蛋白并具有较高的可溶性.表达的PH结构域融合蛋白经谷胱甘肽耦联的琼脂糖珠纯化,以pull-down法检测该PH结构域与6-his调节区的结合.结果表明Akt的PH结构域和调节区基因序列完全正确,得到与GST和6-his的融合表达,表达产物有较高可溶性.SDS-PAGE检测到PH结构域可在体外与调节区特异地结合.