细菌碱性磷酸酶-人甾体受体辅活化因子-1的表达及应用

摘要

从E.coli JM83基因组和人肝总RNA中分别扩增获得细菌碱性磷酸酶(BacterialAlkaline Phosphatase，BAP)基因和人甾体受体辅活化因子-1(Steroid Receptor Coactivator-1，SRC-1)的186个氨基酸对应的基因序列(以下简称SRC186)。用重组技术，构建BAP-SRC186-pET28a融合基因表达载体，在E.coli Rosetta(DE3)中，以IPTG低温诱导表达，获得可溶性融合蛋白BAP-SRC186。表达实验结果表明，Rosetta(DE3)对该蛋白的表达能力强于BL21(DE3)，BAP的存在有利于可溶性SRC186的获得。以对硝基苯磷酸盐(P-nitrophenyl-phosphate，PNPP)为底物进行的活性测定显示，该融合蛋白的BAP比活力为0.176±0.0134 μmol/min/mg蛋白。活性表达的BAP-SRC186融合蛋白被应用于辅活化因子与核受体的相互作用研究。在利福平存在的情况下，BAP-SRC186能与孕烷X受体配体结合域(Pregnane X Receptor Ligand Binding Domain，PXRLBD)发生利福平剂量依赖性的相互作用，作用强度通过BAP的显色反应可方便地检测。BAP融合蛋白能有效应用于蛋白质相互作用研究。