多重反转录聚合酶链反应检测鉴别H7亚型禽流感方法的建立

摘要

参考A型AIV M<,2>基因和HA基因序列,人工设计了两对引物.其中XZ145-2和XZ146为通用引物,可以检测所有A型AIV,跨幅为244bp;XZ H7-1和XZ H7-2亚型AIV特异性引物,跨幅为634bp.通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,成功建立了快速检测鉴别H7亚型AIV多重RT-PCR技术.特异性和敏感性试验结果表明,该多重RT-PCR对H7亚型AIV能够同时扩增出两条大小分别为244bp和634bp的cDNA片段,而对其他A型AIV只扩增出244bp的cDNA片段,对其他常见禽病病原则无论是在244bp还是634bp处均无cDNA扩增片段出现,结果为阴性;该多重RT-PCR最低可检测鉴别10pg的H7亚型AIV RNA.