土耳其斯坦东毕吸虫成虫cDNA文库的构建

摘要

按照SMART cDNA文库构建试剂盒说明,以TRIZOL试剂提取的土耳其斯坦东毕明虫成虫总RNA为模板,以含SfiⅠB酶切位点的oligo(dT)为引物反转录合成第一链cDNA,利用含SfiⅠA酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA5'端延伸出去的模板,采用LD-PCR技术以改良的oligo(dT)引物合成双链cDNA,经蛋白酶K和SfiⅠ消化后,过CHROMA SPIN-400柱进行分级分离.双链cDNA与载体λTripEx2两臂连接,体外包装后构建成土耳其斯坦东毕吸虫成虫的cDNA噬菌体表达文库.经测定文库容量为6.38×10<'6>,文库扩增后的滴度为3.48×10<'10>(Pfu/ml),PCR测定的重组率为92﹪.各项指标表明,我们成功的构建了高质量的cDNA文库,为进一步筛选、克隆保护性抗原基因奠定了基础.