小鼠肝炎病毒A59毒株结构蛋白基因的克隆

摘要

目的：获得小鼠肝炎病毒(MHV)S1、S2、M及N结构蛋白基因,构建4个相应基因的重组质粒.rn 方法：依据Genbank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计S1、S2、M及N结构蛋白基因4对特异性引物,以A59毒株RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增出S1、S2、M及N结构蛋白基因的4个片段,分别将其通过A-T连接入pMD-20 T载体,构建重组质粒.经双酶切鉴定正确后,测序确认.将测序结果与Genbank序列比对.rn 结果：确认扩增得到的S1、S2、M及N核酸序列与Genbank序列公布的相似度分别为100％,99％,100％和99％.rn 结论：成功扩增出S1、S2、M及N的核酸序列,其构建的重组质粒可以作为检测MHV的阳性对照,为建立了RT-PCR快速检测实验小鼠MHV的方法奠定基础.