hTERTC27基因对神经胶质瘤的杀伤效应

摘要

目的：研究用树突状细胞携带hTERTC27基因对胶质瘤细胞的杀伤作用及其机理.rn 方法：将C57BL/6小鼠胫骨和股骨的骨髓冲洗下来,利用红细胞溶解液溶解其中的红细胞.然后与重组鼠源的GM-CSF、IL-4和LPS同培养.在第7天,收集培养液中非贴壁细胞作为目的细胞.流式细胞仪检测分析DCs的表型标志物.腺病毒介导的基因转染DCs.提取细胞的蛋白电离后转到硝酸纤维素膜进行蛋白质印迹分析.再进行细胞毒性试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平.rn 结果：在7d后的细胞培养后,收集了出现典型的形态特征的成熟DCs.其结果表明成熟的DCs表达高水平的CD80、CD86和MHCⅡ,其阳性率分别为87.3％、88.8％和93.8％.Ad-C27和Ad-EGFP腺病毒被用于转染DCs,结果荧光显微镜下大多数的DCs表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP).而Ad-C27转染48h的DCs,利用抗hTERT的抗体可在蛋白印迹分析中,检测到hTERTC27蛋白的表达.腺病毒转染的树突状细胞刺激的细胞毒性T淋巴细胞,其能力的表现是通过检测它们能否溶解肿瘤细胞.在效应细胞/靶细胞的比率为40∶1时,Ad-C27转染的树突状细胞刺激的细胞毒性超过50％.Adv-C27转染的树突状细胞介导U87细胞的溶解率为(50.4±2.95)％,远远高于Adv-EGFP转染的树突状细胞介导的(38.0±1.81)％,以及正常树突状细胞介导的(33.7±2.03)％.T细胞与Adv-C27转染的树突状细胞,Adv-EGFP转染的树突状细胞,以及正常树突状细胞共培养3d,其上清中的IL-2和IFN-γ浓度用ELISA法检测.与AdC27-DCs共培养的T细胞能产生(75.54±5.32)pg/ml的IL-2和(60.86±2.61)pg/ml的IFN-γ,远远高于其他两组.rn 结论：负载hTERTC27的DCs能提高T细胞上清中IL-2和IFN-γ的水平.对U87神经胶质瘤细胞产生巨大的毒性杀伤作用.