一种新的丝氨酸蛋白酶类似物的鉴定及其分子克隆

摘要

根据大黄粉虫体液在前酚氧化酶(ProPO)激活前后非还原性SDS-AGE模型的差异,发现一个新的45kDa蛋白质.利用免疫杂交技术从大黄粉虫的cDNA文库中获得该蛋白完整的核苷酸序列,包括1332个核苷酸,可编码产生444个氨基酸残基并有两个可能的糖基化位点.将该序列与NCBI中的蛋白质序列相比较可知,它与Drosophila melanogaster的伪装蛋白及其他丝氨酸蛋白酶的类似物有高度同源性,因此将其命名为大黄粉虫伪装蛋白(Tm-mas).与其他丝氨酸蛋白酶类似物一样,该蛋白与丝氨酸蛋白酶一级结构相似但催化中心的丝氨酸被谷氨酸所取代,因此该蛋白不具有丝氨酸蛋白酶活性.利用Western-blot技术发现,45kDa Tm-mas是在前酚氧化酶系统激活过程中由一个55kDa前体Tm-mas经切割后获得,从而首次提供了丝氨酸蛋白酶类似物可能参与前酚氧化酶系统激活的实验依据.