抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性

摘要

利用禽流感H9亚型病毒(AIV-H9)作为免疫原,经腹腔免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,采用间接免疫荧光试验(IFA)方法检测阳性克隆,经有限稀释法亚克隆,建立杂交瘤细胞株.结果获得了5株特异性抗禽流感病毒的NP阳性杂交瘤细胞株,分别命名为AIV-NP-2C3、AIV-NP-6A5、AIV-NP-3H9、AIV-NP-7B4、AIV-NP-2H4.筛选的5株单抗与能与所有试验的AIV-H9病毒反应,Western-blot方法鉴定结果表明,这些单抗仅识别禽流感病毒的60KD左右的蛋白抗原,而不与新城疫病毒(NDV)、马立克病毒(MDV)、禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)、禽腺病毒(Aviadenovirus)、传染性法氏囊病毒(IBDV)反应.单抗的腹水IFA效价1:12800～25600,上清IFA效价1∶160～320.初步应用结果显示,用这些单克隆抗体建立的免疫荧光或ELISA方法可以迅速检测出禽流感病毒,这些单抗在禽流感的预防监测中将有十分重要的应用前景。