B型烟粉虱热休克蛋白Hsp70基因的克隆与表达

摘要

本文构建了B型烟粉虱热胁迫cDNA文库,并用B型烟粉虱Hsp70基因部分序列作探针筛选此文库,共获得20个阳性克隆,阳性克隆经过测序和同源性序列比较,发现其中之一是B型烟粉虱Hsp70基因的cDNA序列,该序列全长2207bp,含有1904bp的完整开放阅读框,编码一个644氨基酸的蛋白,计算分子量为70kDa,推导出的氨基酸序列具有70kDa热休克蛋白家族的全部3个签名序列;构建了B型烟粉虱Hsp70的原核表达载体pET21-Hsp70,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功进行了表达.SDS-PAGE分析表明:大部分重组蛋白形成不溶性的包涵体,超声波破碎大肠杆菌细胞后,在上清液中能检测到少量的可溶性蛋白.为了获得大量纯化的可溶性目的蛋白,我们对包涵体进行了溶解和重折叠,并用IDA树脂对蛋白进行了纯化,纯化产物能与人类(Homosapiens)Hsp70抗血清发生交叉反应,证实表达产物属于昆虫热休克蛋白。