传染性胃肠炎病毒SC-A株分离鉴定及S基因克隆

摘要

我们对采集于四川部分猪场的病料进行了处理,接种于ST细胞观察病变,并在电子显微镜下看到了病毒.根据GeneBank报道的序列设计了一对引物,通过RT-PCR技术扩增TGEV四川分离株一条包含了S基因中A、B、C、D四个抗原位点的一段基因序列(约1749bp).通过低熔点琼脂糖纯化回收该片段后,将此片段连接在T载体上,再转化在DH52大肠杆菌里,使用双酶切法进行酶切鉴定后进行测序,结果表明,SC-A株S基因全长1734bp,编码600个氨基酸组成的多肽.该序列与TGEVpurdue株、purdue-115株、TH-98株和T014株的S基因比较,核苷酸的同源性分别为99.9﹪、99.8﹪、99.3﹪、98.3﹪.本实验为以后的S蛋白的表达做好了基础,并为进一步开发诊断试剂奠定了基础.